液氮超低温保藏菌种最可靠

  怎么样利用液氮保藏菌种?
  液超低温保藏法是把菌种装在含有冷冻保护剂的安瓶瓶内，将该安瓶瓶放人液氮(-196℃)中保藏。由于菌丝体处于-196℃，其代谢降低到完全停止的状态。
液氮超低温保藏菌种最可靠
  具体操作如下：    
  (1)菌种制备  菌种在PDA培养基平板上于22-24℃下培养10-15天，菌丝体充分生长后，用打孔器(直径2-4毫米)切割琼脂块，或用手术刀片把菌丝培养物切成2毫米X4毫米长方形小块。
  (2)安瓶管制备  安瓶管的玻璃，要能经受温度突变而不破裂，容易用火焰熔封管口，恢复培养时容易打开。一般采用硼硅玻璃，管的大小根据需要而定，通常是75毫米X 10毫米或能容1.2毫升液体的安瓶瓶比较合适。
选好安瓶管后，用印油书写欲保藏的食用菌菌种的菌号于管壁上，160℃干热灭菌，使印记牢固地固定在管壁上。    
  (3)保护剂  每管加进0.8毫升高压灭菌的10%的甘油水溶液或10%二甲亚讽水溶液可作为冷冻保护剂。
用无菌镊子将这种带有菌丝体的琼脂块移人加有保护剂的安瓶管中。用火焰将安瓶管上部熔封，浸在水中检查有无漏气。
  (4)液氮保藏把已做好的安瓶菌种管放人具有孔洞的小塑料瓶中(在塑料瓶的底部放一块铁片，使塑料瓶连同安瓶管能一起沉人液氮罐中)，盖好瓶盖，在瓶盖上连接一条细绳并作记号，以便提出所需的菌种。把装有安瓶管的塑料瓶吊在液氮罐口上，使安瓶管缓慢地降温，大约30分钟后，把安瓶管浸人液氮中进行长期保存。
  启用液氮罐中保存的菌种时，应先将安瓶瓶置于35-40℃的温水中，使瓶内的冰块迅速融解，然后在无菌条件下开启安瓶瓶，用接种针取菌块移接于适宜的培养基上，置22-24℃活化培养。
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